[VIP第1年] 指数:3
RNA 降解可能的原因如下：
组织取出后没有马上进行处理或冷冻，导致 RNase 的释放降解样品中的RNA。
贴壁细胞在胰蛋白酶处理时被破坏。
样本量太大而加入的 Trizol 液少，导致裂解不完全，不能有效*** RNase的活性，进而导致 RNA 降解。
提取过程中使用的溶液、离心管或***头未经 RNase 去除处理。
RNA 沉淀没有保存于-80°C。
RNA 电泳时的电泳液及电泳槽中含有 RNase，江苏快速RNA提取试剂盒哪家强，江苏快速RNA提取试剂盒哪家强，或者电泳时电泳液温度过高， 造成 RNA 样品被降解。
样品中蛋白和多糖含量高，建议加入氯仿之前先高速离心去除蛋白和多糖，江苏快速RNA提取试剂盒哪家强。 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。江苏快速RNA提取试剂盒哪家强
意：此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除，离心后将纯化柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。
将纯化柱转入一个新的离心管中，加30–100 μl RNase-free ddH2O，室温放置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。
洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。
注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。 江苏四步9分钟完成RNA提取试剂盒信赖推荐取新鲜或-70℃冻存100mg**在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
. 样品处理a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟， 10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
RNA提取注意事项（1）:
迅速灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。 以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活： 1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。 2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活。3）立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。 对基层医疗地区的患者来说，进行基因检测十分不易。
悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5×106-1×107 个细胞加入1ml Trizol， 再用移液器反复吹打。【注】加入 Trizol 前应避免洗涤细胞，会增加 mRNA 降解的可能性。
c. 动、植物组织：取-80°C 冻存的组织在液氮中充分研磨后加入适量的Trizol混匀；或者取新鲜动物或植物组织尽量剪碎，然后加入适量的 Trizol 进行匀浆处理。
将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置 5 分钟以使核蛋白体完全裂解。【注】此步不能省略，时间可以长于 5 分钟。
（可选步骤）4°C，12000rpm 离心 10 分钟，取上清。【注】如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖等可离心除去。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量的 DNA 等物质，上清中含有 RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂， 应除去，然后再取澄清的匀浆溶液进行下一步的操作。 加入吸附柱静置2分钟，2-8 12000rpm ℃ 离心2min，弃废液。江苏四步9分钟完成RNA提取试剂盒信赖推荐
所提取的RNA完整性好、纯度高，可用于分子生物学后实验。江苏快速RNA提取试剂盒哪家强
该产品是一种即用型，适用于细胞或组织总 RNA 提取的含有指示剂的试剂。该产品的作用原理采用与 Invitrogen 公司的 TRIzol 相似的原理和方法，主要成分为苯酚和异硫氰酸胍等，提取步骤和方法也相同。指示剂的颜色也与 TRIzol 的颜色一致，加入氯仿后离心分层，形成上清层、中间层和有机层，上层水相（含 RNA）呈无色，下层有机相呈紫红色。RNA 经异丙醇沉淀便可得到总 RNA。该产品具有极强的裂解能力，可以短时间内裂解细胞和组织样本，并有效***样本中 RNA 的降解，保持RNA 的完整性。提取的RNA 可直接用于多种分子生物学实验，比如RT-PCR， Northern blot，体外翻译、cDNA 克隆、RNase 保护实验以及高通量测序等对 RNA 质量要求较高的情况。江苏快速RNA提取试剂盒哪家强
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